Métodos / Methods
Metodologias Comportamentais
Abaixo são descritas as metodologias comportamentais utilizadas e padronizadas no Neuroscience Coworking Lab / UFSC.
Comportamento Exploratório – Ferramentas comportamentais para análise de parâmetros de ansiedade em roedores:
Campo Aberto
Relevância do modelo:
Este modelo é empregado para avaliar a atividade exploratória dos animais. A tendência natural do animal em um ambiente novo é a de explorá-lo, apesar do estresse e do conflito provocado pelo ambiente novo (Prut e Belzung, 2003). Esse parâmetro comportamental permite uma mensuração do nível de excitabilidade do sistema nervoso central e, assim, a avaliação da atividade locomotora espontânea de roedores tem sido utilizada para analisar o putativo efeito de drogas sobre o sistema nervoso central, sendo que agentes que suprimem a atividade locomotora podem/devem apresentar ação/propriedades sedativas e agentes que aumentam a atividade locomotora podem/devem apresentar propriedades estimulantes (Archer, 1973). Por exemplo, a atividade exploratória de roedores é influenciada por neurolépticos (e.g., haloperidol) ou benzodiazepínicos, que agem como sedativos.
Labirinto em Cruz Elevado
Relevância do modelo:
Este modelo baseia-se no conhecimento de que roedores evitam locais abertos e elevados. Quando neles confinados, mostram sinais de medo – congelamento, defecação e micção – e aumento do nível plasmático do hormônio de estresse, cortisona. O roedor explora ambos os braços, abertos e fechados, mas tipicamente entrará com maior frequência e permanecerá por mais tempo nos braços fechados. Uma maior intensidade de “ansiedade” equivale a menor preferência por braços abertos. Este teste representa um importante instrumento de pesquisa na área experimental para estudos de comportamentos relacionados à ansiedade, em especial na análise do efeito farmacológico de novas drogas (Lister, 1987).
* Demais modelos utilizados: Caixa Claro e Escuro; Teste de Esconder Esferas.
Comportamento Exploratório – Ferramentas comportamentais para análise de parâmetros de aprendizagem e memória em roedores:
Labirinto em T
Relevância do modelo:
O labirinto em T pode ser usado de várias maneiras para avaliar a capacidade cognitiva de um animal. Os braços podem conter estímulos discriminativos (sugestões) aos possibilita os animais obterem uma memória espacial de referência, isto é, se a primeira escolha do animal foi o braço a, na segunda ele tenderá a preferir o braço b (não visitado). Esse movimento é denominado Alternância Espontânea e danos em estruturas encefálicas, como o hipocampo, prejudicam a formação dessa memória (Deacon e Rawlins, 2006).
Reconhecimento de Objetos
Relevância do modelo:
Testes comportamentais que avaliam a habilidade em reconhecer um estímulo previamente apresentado constituem o cerne dos modelos animais de amnésia humana (Baxter, 2010) [e.g., Benton Visual Retention Test, teste de reconhecimento de objetos para humanos]. Neste sentido, a tarefa de reconhecimento de objetos avalia a habilidade de roedores em reconhecer um novo objeto no ambiente. Basicamente, neste teste, não há reforços positivos ou negativos, e esta metodologia afere a preferência natural por novos objetos exibida por roedores. O procedimento experimental consiste de três fases: habituação, familiarização e a fase de teste. Ressalta-se que a tarefa de reconhecimento de objetos é particularmente atrativa porque não requer motivação externa, recompensa ou punição – apenas um pouco de treinamento e habituação é requerido – sendo que a tarefa pode ser completada em um período relativamente curto de tempo. Os resultados deste paradigma são influenciados tanto por lesões corticais (Buckmaster et al., 2004; Clark et al., 2000).
*Demais modelos utilizados: Esquiva passiva do tipo step-down; Labirinto aquático de Morris; Realocação de Objetos.
Comportamento Exploratório – Ferramentas comportamentais para análise de parâmetros de depressão em roedores:
Suspensão pela Cauda
Relevância do modelo:
O diagnóstico clínico da depressão requer a presença de diversos sintomas centrais (e.g., humor deprimido, prazer diminuído) normalmente acompanhados de sintomas variados como irritabilidade, mudanças de peso, distúrbios no sono, sentimento de culpa, baixa concentração, pensamentos de morte, suicídio, etc. De modo claro, não é possível reproduzir em animais todos os sintomas observados clinicamente. Neste sentido, medidas relacionadas à resignação (comumente denominado “desamparo aprendido” ou “desespero comportamental”) são utilizadas como o principal parâmetro comportamental nos testes de screening de atividade antidepressiva em camundongos, como o teste da suspensão pela cauda. O teste da suspensão pela cauda foi desenvolvido por Steru e colaboradores (1985) baseado na premissa que um animal submetido a uma situação estressante e inescapável apresenta dois tipos de comportamentos alternados, a agitação, característica da tentativa de escape da situação de estresse, e a imobilidade. Este padrão de comportamento também pode ser chamado de “searching-behavior”, caracterizado pela alternância de intensa atividade motora e gasto de energia com a imobilidade (Steru et al., 1985). Neste sentido, fármacos antidepressivos comumente utilizados na clínica são capazes de reduzir o tempo de imobilidade de animais submetidos ao teste da suspensão pela cauda (Steru et al., 1985; Cryan e Holmes, 2005).
Teste da Borrifagem de Sacarose – Splash Test
Relevância do modelo:
Este teste foi desenvolvido como um índice de autocuidado e comportamento motivacional, considerado paralelo com alguns sintomas de depressão, como o comportamento anedônico (Willner, 2005). O “splash test” é utilizado para avaliar o comportamento de auto-limpeza (“grooming”) dos animais, após a borrifagem dos mesmos com solução de sacarose a 10%. Em modelos animais de depressão, a administração crônica de antidepressivos clássicos aumenta o tempo despendido neste comportamento (Yalcin et al., 2005).
*Demais modelos utilizados: Nado forçado; Consumo de sacarose.
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Comportamento Motivacional e Recompensa – Ferramentas comportamentais para análise de parâmetros reforçadores positivos e negativos em roedores:
Teste do Runway
Relevância do modelo:
O teste do runway é utilizado para avaliar a motivação do animal para buscar a recompensa. O desempenho para obter uma recompensa alimentar é um paradigma comportamental clássico, que gera curvas de aquisição do aprendizado (latência para atingir a recompensa), bem como medidas de velocidade e trajetórias indicativas de motivação e comportamento dirigido ao reforço.
Teste da Preferência Condicionada ao Local
Relevância do modelo:
A preferência condicionada de lugar (PCL) é um modelo animal amplamente utilizado para avaliar os efeitos reforçadores de drogas com potencial de abuso em humanos (Bardo e Bevins, 2000). Este teste avalia a capacidade do animal em associar o efeito reforçador da droga com dicas do ambiente.
